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中药治疗人工感染猪弓形虫病试验

时间:2022-10-22 20:30:03 来源:网友投稿

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'v(~9ii_]u]v=t0'$Ɗejƚ==tm?uߎ]Muim{wwimM7对照组又分强毒对照:每批试验共设1组,每组1头;药物对照:每种药物设1头;健康对照:每批试验共设1组,每组1头。治疗组按不同药物分别分为大、中、小剂量组。

1.2.3 生物回归试验 分别于攻毒后7、14 d,在AT10、AT20、AT10+203组中各随机抽样检查经药效判定认为对弓形虫滋养体有效的猪1头(共6头)剖杀,取腹水、脑、肝、脾、肠淋巴结、膈肌,按病原分离程序和方法,分别接种健鼠3只(肝、脾、淋、膈混合为1组),并分别于7、14 d盲传1代,传递3代,分别测算各生物回归试验组鼠的阳性率。

1.2.4 临床检查[9] 每天测温2次(上午体温超过40 ℃,下午超过40.5 ℃即认为升温,并以此统计稽留期),脉搏、呼吸、心、肺、眼结膜、鼻、胃肠、食欲、粪尿、体表淋巴结和精神、行动等常规观察与检查1次,检查期30 d。分别统计体温稽留小时数,并采用t测定法进行均数差异显著性分析,比较各组与强毒对照组的差异性。

1.2.5 荷虫量检查[10] 分别在投药前和临床检查结束时抽取腹水,以压片镜检法观察虫体形态、运动和活力。以白细胞计数法计算荷虫量,计算减少率。并采用χ2测定法进行差异显著性分析,比较各组与强毒对照的差异性。

减少率=(1-投药后荷虫数投药前荷虫数)×100%。

2 结果与分析

2.1 药物安全性试验

通过45头猪的药物安全性观察,获得不同药物的安全有效剂量,结果见表1。

表1 试验药物安全剂量

试验药物

大剂量 中剂量 小剂量

剂量

(mg/kg) 试验猪数

(头) 剂量

(mg/kg) 试验猪数

(头) 剂量

(mg/kg) 试验猪数

(头)

AT10 2.50 10 0.25 3 0.05 2

AT20 50.0 10 2.50 3 0.50 2

AT10+20 2.50+25.0 10 0.25+2.50 3 0.05+0.50 2

AT10以大剂量腹腔注射试验猪后,15 min内出现口涎增多、扭腰、步履蹒跚、精神迟滞等毒副反应。30 min左右明显缓解,1 h左右基本恢复正常。注射第2、第3剂后都曾出现类似反应,但未再加剧。在正式治疗试验中也未出现严重药物毒副反应,基本安全。以中剂量腹腔注射试验猪后均未见异常反应,安全性能良好。以7.5 mg/kg大剂量腹腔注射试验猪后15 min出现严重毒副反应,口吐大量白色泡沫,扭腰伸颈,后肢伸直,站立不稳,行走困难,频频起卧,肌肉震颤,精神沉郁。2 h后逐渐缓解,4~8 h基本恢复。注射第2剂后 15 min 内出现上述症状,并逐渐加剧,其中1头注第2剂后25 min死亡,另1头注第2剂后8 h基本恢复。注第3剂后仍出现类似症状,8 h左右基本康复。

AT20以大剂量腹腔注射试验猪后,15 min内出现呕吐、伸腰、行走不稳等反应。1 h左右开始缓解,2 h基本恢复,注射第2、第3剂曾出现过类似反应,但未见加剧。在正式试验中都未出现严重药物毒副反应,基本安全。以中剂量腹腔注射仔猪后,均未见任何异常反应,安全性能良好。

AT10+20以大剂量腹腔注射试验猪后,15 min内出现口涎增多、呕吐、扭腰、步履蹒跚、精神迟滞等毒副反应,15 min后毒副反应逐渐缓解,2 h左右基本恢复正常。注射第2、第3剂后,都曾出现过类似反应,但未见加剧,似无蓄积现象。以中、小剂量腹腔注射试验猪,均未见异常反应,安全性能良好。

2.2 药物治疗试验

根据药效判定标准认为以AT100.25~2.5 mg/kg治疗猪弓形虫病,对滋养体杀灭率为100%;以AT100.05 mg/kg治疗猪弓形虫病,对滋养体杀灭率为95.23%。

根据药效判定标准认为以AT200.5~50 mg/kg治疗猪弓形虫病,对滋养体杀灭率达到95%左右。

根据药效判定标准认为以AT10+20 的0.05~2.5+0.5~25 mg/kg治疗猪弓形虫病,对滋养体杀灭率为100%(表2)。

表2 不同药物治疗效果比较

试验药物 组别

荷虫量(mm3) 体温

治疗前虫数

(头)

治疗后 差异显著性

虫数(头) 减少率(%) χ2值 结果

稽留时间

(h)

差异显著性

t值 结果

AT10 大剂量 10 730 0 100 333.37 P<0.01 44.4 6.860 P<0.01

中剂量 10 634 0 100 330.37 P<0.01 68.0 4.698 P<0.01

小剂量 10 600 506 95.23 282.44 P<0.01 84.0 7.639 P<0.01

强毒对照 11 254 12 100 123.27

AT20 大剂量 9 954 512 94.85 256.06 P<0.01 44.4 21.814 P<0.01

中剂量 10 400 500 95.19 276.92 P<0.01 68.0 3.188 P<0.01

小剂量 10 900 511 95.31 283.58 P<0.01 84.0 2.276 P<0.01

强毒对照 11 254 12 100 123.27

AT10+20 大剂量 11 260 0 100 349.84 P<0.01 2.40 21.303 P<0.01

中剂量 11 534 0 100 356.84 P<0.01 36.0 6.475 P<0.01

小剂量 10 800 0 100 335.51 P<0.01 60.0 2.578 P<0.05

强毒对照 11 254 12 100 123.27

2.3 生物回归试验

由表3可知,AT10、AT10+20 对包囊有效,对包囊的杀灭率分别达到100%、98.04%。AT20对包囊无效。强毒攻击后自然耐过猪剖杀取材回归小白鼠,结果表明,第1代鼠100%典型发病并在7 d内死亡。

表3 生物回归试验阳性率结果比较

组别

回归试验小鼠阳性率(%)

7 d组 14 d组

腹水 脑 肝、脾、淋、膈 平均 腹水 脑 肝、脾、淋、膈 平均

总阳性率

AT10 0 0 0 0 0 0 0 0 0

AT20 35.71 35.71 30.77 33.33 83.33 25.00 29.17 41.67 37.25

AT10+20 0 0 0 0 8.33 8.33 0 4.16 1.96

强毒对照 100 100 100 100

3 结论与讨论

治疗弓形虫病的理想药物应能阻止感染和预防包囊形成,如已形成包囊则应破坏它或使包囊内的虫体死亡[11-12]。本试验用5种中药对人工感染猪弓形虫病进行治疗试验,通过治疗结果比较,筛选出3种治疗弓形虫病的新特效药AT10、AT20、AT10+20,其中AT10和AT10+20对弓形虫体滋养体和包囊均有强大的杀灭作用,AT20仅对弓形虫滋养体有效。AT10、AT20均系中药制剂,药源广、成本低、用量少、疗效高,相关药理机制还有待进一步研究。

参考文献:

[1]姜淑芳,王 珊,杜云静. 我国弓形虫病研究新进展[J]. 实用寄生虫病杂志,2002,10(1):37-39.

[2]孙志伟,王明道. 弓形虫病化疗药物的研究进展[J]. 中国寄生虫病防治杂志,1996,9(3):222-223.

[3]刘九生,陈恩辉. 仔猪急性腹泻型弓形体病的治疗[J]. 四川畜牧兽医,1996(4):42-43.

[4]吕元聪. 治疗弓形虫病的几种新药物[J]. 右江医学,1999,27(4):224-227.

[5]舒衡平,蒋立平,刘 多. 几种广谱抗生素抗小鼠急性弓形虫病的效果观察[J]. 中国人兽共患病杂志,2000,16(1):59-60.

[6]甘绍伯. 弓形虫病的治疗[J]. 中国抗感染化疗杂志,2001,1(2):118-120.

[7]Derouin F,Chastang C. In vitro effects of folate inhibitors on Toxoplasma gondii[J]. Antimicrob Agents Chemother,1989,33(10):1753-1759.

[8]于恩庶. 弓形虫病学[M]. 福州:福建科学技术出版社,1992:3-6.

[9]肖 达. 氯苯胍对体外弓形虫的作用[J]. 中国人兽共患病杂志,1991,7(5):64.

[10]Moreno S N,Li Z H. Anti-infectives targeting the isoprenoid pathway of Toxoplasma gondii[J]. Expert Opin Ther Targets,2008,12(3):253-263.

[11]宋贤响,万红娇,杨翠萍. 中药抗弓形虫感染的研究思路与方法[J]. 江西中医学院学报,2006,18(1):76-78.

[12]游运辉,欧阳颗,向选东. 用蒿甲醚治疗实验小鼠急性弓形虫感染的研究[J]. 中国现代医学杂志,2000,10(6):35-36.

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